免疫比濁平臺

免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immunoassay）也被稱作免疫濁度法，是一種將現(xiàn)代光學測量儀器、自動分析檢測系統(tǒng)與抗原抗體免疫沉淀反應相結(jié)合的技術。當溶液中的抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合形成免疫復合物，免疫復合物會從液相析出使溶液產(chǎn)生一定的濁度，當有光線通過溶液時，光線在碰到抗原抗體復合物后就會產(chǎn)生折射或吸收，測定這種折射和吸收后的透射光或散射光，即可得到溶液的濁度，進而計算出樣品的含量。

利用免疫比濁平臺能夠準確的對液體介質(zhì)中的微量抗原、抗體、藥物及其他小分子半抗原物質(zhì)進行測定，在臨床上具有廣泛的應用。

免疫比濁原理

當抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時，形成小分子可溶性免疫復合物，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現(xiàn)濁度，當反應液中保持抗體過剩時，形成的復合物隨抗原量增加而增加，反應液的濁度亦隨之增加，反應液濁度與抗原含量呈正相關。當光線通過反應液時遇到這些微粒后會形成折射或吸收，對透射光或折射光強度進行測定即可得到反應液濁度。用一系列已知濃度的抗原標準品進行試驗，制備標準曲線，即可求出標本中抗原含量。

免疫比濁技術原理

圖1：免疫比濁原理

抗原抗體復合物形成與光濁度的關系

抗原抗體的比例是濁度形成的關鍵因素，反應物抗原與抗體的比例決定了復合物顆粒的大小?？乖?抗體復合物形成可以分為三步：

1. 初步形成抗原-抗體二元復合物
2. 復合物交聯(lián)成大的網(wǎng)絡狀復合物；
3. 復合物產(chǎn)生絮狀沉淀。

抗原抗體在等價時，抗原和抗體全部結(jié)合，即無過剩的抗原，也無過剩的抗體，這時復合物的形成和解離相等；當反應液中抗體過量時，復合物隨著抗原量遞增至而增加，至抗原抗體量相當時反應液濁度達到最高點；當抗原過量時，復合物小，光散射少。所以在比濁法中必須在反應液中抗體過量時進行。

發(fā)展歷程

在1938年，Libby將光濁度測定原理用到了抗原抗體反應上，并對這種新的檢測方法進行了摸索。但當時由于蛋白質(zhì)純化技術不完善，特異性血清制備有困難，因此阻礙了技術的發(fā)展。他在這方面的研究雖然沒有得到滿意的結(jié)果，但卻成功地吸引了許多學者的目光。

20世紀50年代末60年代初，Schultze和Schwick提出若干種血漿蛋白與其特異抗體結(jié)合后形成的抗原抗體復合物可以引起液體濁度改變，并可以用比濁計來進行測定，成功地提出了“透射比濁法”。但遺憾的是，這種方法當時因其靈敏度低而沒有被廣泛接受。

1967年，Ritchie提出了用激光散射法來測定抗原抗體復合物，這中方式被稱之為“散射比濁法”。這使得常規(guī)的凝膠內(nèi)擴散沉淀法由數(shù)十小時縮短為數(shù)十分鐘。從此，免疫比濁技術開始了快速發(fā)展。同時，飛速發(fā)展的單克隆抗體技術也對免疫比濁法起到了極大的促進作用。20世紀70年代初，出現(xiàn)了利用濁度進行的自動檢測系統(tǒng)，但由于用激光作為光源，且固定波長，所以靈敏度較低，而且時間一般要2～3h。到20世紀70年代末，出現(xiàn)了速率比濁計，使抗原抗體結(jié)合的反應在幾十秒內(nèi)出結(jié)果，這帶來了免疫化學測定的革命性的發(fā)展。

如今，自動化免疫分析系統(tǒng)更加飛速發(fā)展，已經(jīng)成為了免疫診斷技術中最重要的檢測手段之一。它使得臨床化學檢驗方法的靈敏度更高、特異性更強，自動化程度更高。尤其為疾病的診斷、療效觀察及病因探討提供了更直接和客觀的資料。

免疫比濁分類

按測定方法分類

按照測定方法的不同可以將免疫比濁分為終點濁度測定法和速率濁度測定法，前者是測定抗原與抗體結(jié)合反應完成后測定其復合物的量，后者是在抗原與抗體反應的最高峰（約1分鐘）測定其復合物形成的量。

按照檢測儀器分類

當光線遇到免疫復合物時會發(fā)生透射或散射，對透射光或散射光進行檢測均可測得反應液濁度，因此可以按照檢測儀器將免疫比濁分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。

免疫透射比濁法：入射光線與光度接收器在同一水平面上的檢測方法，目前臨床應用較多的是免疫透射比濁技術。

免疫散射比濁法：入射光線與光度接收器不在同一水平面上的檢測方法（光度接收器與水平面形成0°到90°的夾角）

按照有無增強作用分類

按照有無增強作用可以將比濁分為普通免疫比濁和膠乳增強免疫比濁。

普通免疫比濁：值抗原抗體直接反應產(chǎn)生濁度進行分析的方法。

膠乳增強免疫比濁：即指羧基化聚苯乙烯微球通過EDC偶聯(lián)上抗體，再于抗原反應，起到信號放大作用的方法。

免疫比濁試劑盒

免疫比濁平臺由檢測儀器及免疫比濁試劑盒兩部分組成，下面就免疫比濁試劑盒做一介紹。免疫比濁試劑盒一般包含3部分：

檢測試劑：又分為試劑R1和試劑R2，試劑R1主要是緩沖鹽體系，提供抗原抗體比較適宜的反應條件；試劑R2主要成分就是抗體（膠乳比濁試劑盒R2試劑為偶聯(lián)上抗體的羧基化聚苯乙烯膠乳微球），R2試劑制備是免疫比濁試劑盒的核心技術。

校準品：為檢測試劑在生化儀上制作標準曲線的定制和抗原樣品。

質(zhì)控品：為檢測試劑在生化儀上的重復性，穩(wěn)定性的定值抗原樣品。

免疫比濁試劑盒評價

免疫比濁試劑盒評價主要包括以下內(nèi)容：

精密度：包括批內(nèi)精密度和批間精密度；

線性范圍：評價試劑在一定范圍內(nèi)的線性程度；

準確度：評價試劑與其他廠家是否具有可比性；

抗干擾能力：評價試劑在一定干擾物質(zhì)存在的條件下，測試值與理論值的差距是否在合理范圍內(nèi)；

穩(wěn)定性：包括上機開瓶穩(wěn)定性，實時儲存穩(wěn)定性及運輸穩(wěn)定性；

臨床應用

免疫功能監(jiān)測：免疫球蛋白A、免疫球蛋白C、免疫球蛋白M、免疫球蛋白輕鏈k，免疫球蛋白輕鏈λ、補體C3、補體C4等。

心血管疾病檢測：載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白α等

炎癥狀況檢測：C-反應蛋白、血清淀粉樣蛋白A、降鈣素原、銅藍蛋白等。

類風濕性關節(jié)炎檢測：類風濕因子、C-反應蛋白、抗鏈球菌溶血素O等。

腎臟功能監(jiān)測：尿微量白蛋白、α1微球蛋白、β2微球、轉(zhuǎn)鐵蛋白、免疫球蛋白G等。

營養(yǎng)狀態(tài)監(jiān)測：白蛋白、前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。

新生兒體檢：C反應蛋白、免疫球蛋白A、前白蛋白、免疫球蛋白G等

凝血及出血性疾病的檢測：抗凝血酶Ⅲ、觸珠蛋白等

藥物濃度檢測：丁胺卡那霉素、卡馬西平、慶大霉素、苯巴比妥、苯妥因奎尼丁、妥布素等。