SRT逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV）
抗體參數(shù)
| 名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) | 價(jià)格 |
| SRT逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV） | 2000U | R267n7 | 咨詢 |
| 10000U |
產(chǎn)品描述
SRT Reverse Transcriptase是經(jīng)過(guò)基因改造的MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，通過(guò)引入突變來(lái)降低RNase H活性，改進(jìn)熱穩(wěn)定性。SRT Reverse Transcriptase可廣泛應(yīng)用于RT-PCR、cDNA第一鏈合成等。
活性定義
以 Poly(A)/Oligo(dT)為模板/引物，在 37℃的條件下，10 分鐘內(nèi)催化1 nmol dTTP摻入酸不溶性物質(zhì)中所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位(unit)。
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. 各組分取出后在冰上融解，渦旋混勻后瞬時(shí)離心，然后在RNase-free離心管中配制混合液：
| 組分 | 使用量 |
| RNA模板 | Total RNA≤5 μg，或mRNA≤500 ng |
| Oligo (dT) (50 μM) 或隨機(jī)引物 或特異引物 |
50 pmol 或50-250 ng 或2 pmol |
| dNTPs (10 mM) | 1 μl |
| RNase-free ddH2O | 補(bǔ)充至13 μl |
2. 65℃孵育5min，然后立即轉(zhuǎn)至冰上孵育至少1min，短暫離心收集反應(yīng)液。
3. 在上述管中配制如下反應(yīng)液至總體積為20 μl。
| 組分 | 使用量 |
| 步驟1中反應(yīng)液 | 13 μl |
| 5 X RT Buffer | 4 μl |
| DTT (0.1 M) | 1 μl |
| RNase Inhibitor (40 U/μl) | 1 μl |
| SRT Reverse Transcriptase (200 U/μl) | 1 μl |
使用振蕩器輕輕渦旋混勻，瞬時(shí)離心后置于冰上。
4. 按照如下條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
| 溫度 | 時(shí)間 |
| 25℃*b | 5min |
| 50℃*c | 30~60min |
| 70℃ | 15min |
*b. 使用隨機(jī)引物時(shí)，添加此步驟。
*c. 使用特異引物或GC含量高的模板以及復(fù)雜模板時(shí)，建議使用溫度提高至55℃。
5. 合成的cDNA可用于后續(xù)PCR或qPCR等實(shí)驗(yàn)。
保存溫度
-20℃或更低溫度長(zhǎng)期保存。
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